Colonne HPLC
TUNLAB spécialiste en chromatographie HPLC et GC depuis bientôt 20 ans. La chromatographie est une technique dans laquelle les constituants d’un mélange se séparent en fonction des vitesses auxquelles ils sont entrainés à travers une phase stationnaire par une phase mobile.
Il existe diverses méthodes de chromatographie utilisées quotidiennement par les chimistes, biologistes tels que HPLC, GC.
Chromatographie HPLC
Les phases utilisées en chromatographie liquide possèdent des caractéristiques très diverses, notamment en termes d’hydrophobicité, de sélectivité et de polarité. Le comportement chromatographique de la colonne pourra être très différent, en fonction de ces différents paramètres.
En savoir plus, tunlab vous offre des colonnes analytiques en inox de diamètre interne est de 1 mm pour les colonnes micro bores ou 2,3 ,4 ou 4.6 mm avec une longueur de 30 à 250 mm, ainsi des colonnes préparative avec des différentes dimensions et des différentes phases et aussi des colonnes SPE exemple colonnes chroma bond.
Dans ce contexte, nous proposons une très large gamme de colonnes, afin de mettre à votre disposition le produit qui réponde à vos besoins spécifiques.
APPLICATIONS
Elles se présentent sous la forme d’un tube d’une dizaine de cm en acier d’un diamètre de 2 à 5 mm. Cependant des colonnes capillaires sont de plus en plus utilisées (ID = 1 mm).
Une colonne de garde est généralement placée avant la colonne ainsi qu’un filtre.
La phase stationnaire : le plus souvent en gels de silices qui sont par la suite greffées pour améliorer les propriétés. Elles sont fabriquées par synthèse sol-gel.
La plupart des colonnes actuelles en gel de silice sont peu polaires et hydrophobes. Elles sont dîtes à phase inverse.
Les colonnes de type C18 et C8, peu polaires sont très largement utilisées.
Technologies
En HPLC de l’échantillon est forcé par un liquide sous haute pression (la phase mobile) à travers une colonne qui est emballé avec une phase stationnaire constituée de particules de forme irrégulière ou sphérique, ou une membrane poreuse. HPLC est traditionnellement divisé en deux sous-classes différentes en fonction de la polarité des phases mobile et stationnaire. Des procédés dans lesquels la phase stationnaire est plus polaire que la phase mobile.
Ces colonnes de haute technologie à base de silice greffée sont conçues pour associer une grande capacité de charge, une excellente stabilité à bas pH et de fortes efficacités.
Choix de critères
Il est bon de rappeler que les solvants doivent avoir une qualité HPLC et qu’ils doivent être dégazés. Lorsque l’eau est utilisée comme solvant elle doit avoir une résistivité de minimum de 18Mohms. Le dégazage est peut être effectué par barbotage dans l’hélium mais il existe également des dégazeurs plus sophistiqué dans le commerce.
Le choix du solvant dépend également de la colonne utilisée : type de colonne, domaine pH d’utilisation…
En fait pour chaque type de colonne il existe un débit d’éluant idéal pour lequel l’efficacité de la séparation est maximale. De même, un débit trop fort peut provoquer des traînées de pic. La granulométrie à savoir la taille des billes de silice (le cas échéant) est également importante, plus la taille des billes est petite meilleure sera l’efficacité de la séparation.
Quand même le plus important est le choix de la phase stationnaire, les autres paramètres étant à adapter en fonction de la qualité de séparation voulue.
Les autres paramètres tels que le diamètre interne de la colonne, sa longueur sont à voir en fonction des temps d’analyses, des volumes injectés.